電泳
電泳是帶電顆粒在電場作用下，向著與其電荷相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象。 在一定pH條件下，每一種分子都具有特定的電荷（種類和數(shù)量）、大小和形狀，在一定時(shí)間內(nèi)它們在相同電場中泳動(dòng)速度不同，各自集中到特定的位置上而形成緊密的泳動(dòng)帶。這就是帶電粒子可以用電泳技術(shù)進(jìn)行分離、分析和鑒定的基本原理。


 


影響泳動(dòng)度的因素

1. 電場強(qiáng)度：

電場強(qiáng)度是指每厘米的電位降，也稱電位梯度(電勢梯度)。電場強(qiáng)度越高，則帶電顆粒泳動(dòng)越快。根據(jù)電場強(qiáng)度的不同，電泳可分為： 常壓(100-500V)電泳。其電場強(qiáng)度為2-10V/cm。分離時(shí)間較長，從數(shù)小時(shí)到數(shù)十小時(shí) ，適合于分離蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)。如我廠生產(chǎn)的DYY-6D、 6C、 8C等 高壓(2000-10000V)電泳。其電場強(qiáng)度為50-200V/cm，電泳時(shí)間很短，有時(shí)只需幾分鐘。多用于分離氨基酸、多肽、核苷酸、糖類等小分子物質(zhì)。如DYY-15D、 DYY-12型、 DYY-12C、 DYY-10C、 DYY-11型

2 溶液的性質(zhì)

1)PH值

溶液的PH決定帶電顆粒的解離程度，也即決定其帶靜電荷的量。對蛋白質(zhì)而言，溶液pH值離等電點(diǎn)越遠(yuǎn)，則顆粒所帶的凈電荷越多，泳動(dòng)速度也越快；反之，則越慢。因此分離某種蛋白質(zhì)混合液時(shí)，應(yīng)選擇合適的pH,使欲分離的各種蛋白質(zhì)所帶的電荷數(shù)量有較大的差異

2)離子強(qiáng)度

溶液的離子強(qiáng)度一般在0.02-0.2之間，電泳較合適。若離子強(qiáng)度過高，則會(huì)降低顆粒泳動(dòng)速度；若離子強(qiáng)度過低，則緩沖能力差，往往會(huì)因?yàn)槿芤篜H值的變化而影響泳動(dòng)度的速率


3)溶液黏度

泳動(dòng)度與溶液黏度是成反比關(guān)系

3 顆粒性質(zhì)

顆粒直徑、形狀以及所帶靜電荷量對泳動(dòng)度有較大的影響。一般來說，顆粒的靜電荷量越大，或其直徑越小，或其形狀越接近球形，在電場中的泳動(dòng)速度就越快。反之，則越慢

4 電滲

電泳緩沖液相對于固體支持物的移動(dòng)稱電滲。當(dāng)支持物不是絕對惰性物質(zhì)時(shí)，常會(huì)因?yàn)橹С治锷洗嬖诘碾x子基團(tuán)如羧基、羥基等吸附電極溶液中的正離子，使靠近支持物的溶液層相對帶電，向負(fù)極移動(dòng)，反之，若支持物的離子基團(tuán)吸附溶液中的負(fù)離子，則溶液層向正極移動(dòng)。電滲作用會(huì)影響顆粒的泳動(dòng)度，因此，在電泳時(shí)，電滲小些為好。


5 焦耳熱 電泳時(shí)會(huì)產(chǎn)生焦耳熱，使介質(zhì)粘度下降，分子運(yùn)動(dòng)加快，遷移率增加，同時(shí)溫度過高會(huì)使樣品中的生物大分子變性失活，因此電泳時(shí)，要控制電壓或電流，也可安裝冷卻散熱裝置。如我廠生產(chǎn)的DYCZ-24EN,DYCZ-24F,均具有冷卻循環(huán)裝置,可與WD-9412A型恒溫循環(huán)器配套使用

Q=I2Rt

Q-釋放出的熱量，I-電流強(qiáng)度，R-電阻，t-電泳時(shí)間

6.支持物

現(xiàn)代電泳多在固體支持物上進(jìn)行，使樣品中的不同組分形成不同的區(qū)帶，稱區(qū)帶電泳。電泳結(jié)束后，支持物可以方便地進(jìn)行染色等后續(xù)處理。 對支持物的一般要求是均勻，吸附力和電滲小，機(jī)械性能好，便于染色或紫外光下檢測，故最好透明，無紫外吸收。常用支持物有濾紙，醋酸纖維素薄膜，淀粉凝膠，聚丙烯酰胺凝膠，瓊脂糖凝膠等 支持物性質(zhì)不同也會(huì)影響泳動(dòng)速率，如瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠都有大小不同的篩孔，在篩孔大的凝膠中溶質(zhì)顆粒的泳動(dòng)速率快，反之則慢。